檢測抗多肽反應(yīng)是否發(fā)生的最簡單方法就是抗多肽ELISA。有兩種技術(shù)可以將多肽鏈接到ELISA板上。第一種方法就是直接將多肽鏈接到盤上。但如果鏈接氨基酸恰好是抗原決定簇的一部分，則抗體無法和多肽進(jìn)一步鏈接，這樣產(chǎn)生假陰性結(jié)果的可能性增加。第二種方法則是先將多肽與載體蛋白耦合，然后將多肽－蛋白耦合體鏈接到ELISA盤上。這種鏈接方法會使抗體－多肽的結(jié)合成功率提高，因?yàn)槎嚯牟皇侵苯忧度氡P膜，因而會更加暴露給抗體。這種方法因而更可靠，可重復(fù)性更高。需要注意的是，用于該方法的載體蛋白必須不同于用于免疫耦合的載體蛋白。這樣會避免血清中抗載體蛋白反應(yīng)所導(dǎo)致的高背景反應(yīng)。

?????當(dāng)做血清檢測時(shí)，另一點(diǎn)需要記住的是，由于免疫多肽與自然多肽結(jié)構(gòu)上的差別，檢測時(shí)的抗多肽反應(yīng)與試劑的抗多肽反應(yīng)可能是不同的。任何檢測，尤其是測定滴定量以決定收獲點(diǎn)時(shí)，必須包括針對天然狀態(tài)下蛋白的檢測。當(dāng)然可以做針對天然狀態(tài)下蛋白的ELISA；但由于血清在不同檢測體系中表現(xiàn)會不一樣，因此最好在血清被日常使用的體系中進(jìn)行蛋白識別鑒定。如果血清將用于免疫沉淀反應(yīng)，就應(yīng)該進(jìn)行針對該反應(yīng)的檢測。

?產(chǎn)生具有優(yōu)良性能的抗體。訂購定制的連接多肽，這樣您可以增加抗原的免疫原性。如果多肽小于6KD，我們特別推薦做連接。半抗原載體連接選擇包括：

·?????????keyhole?limpet?hemocyanin?(KLH)

·?????????bovine?serum?albumin?(BSA)

·?????????thyroglobulin?(THY)

·?????????ovalbumin(OVA)

????此外，您可以選擇多抗原多肽（MAP）連接,它提供一個(gè)有分支的賴氨酸核心可替代的多種構(gòu)型的合成多肽。在決定使用MAP技術(shù)還是傳統(tǒng)的載體蛋白做連接時(shí)，請注意下列指導(dǎo)：

·?????????半光氨酸會形成非特異二硫鍵。如果您關(guān)注二硫鍵的構(gòu)型，使用KLH

·?????????如果這種多肽是一直被成功地用來生產(chǎn)抗體，效仿已經(jīng)使用的方法。?

·?????????由于多肽通過C末端連接，而MAP技術(shù)有利于N末端或內(nèi)部的多肽，不推薦使用在嚴(yán)格C末端連接的多肽上。連接載體也可能會導(dǎo)致一些空間障礙。使用KLH做C末端連接。?

·?????????由于在傳統(tǒng)的C18?HPLC時(shí)，MAP多肽的性能更類似于大的蛋白，因而未提供純化。?

長度
????合適的多肽長度有利于優(yōu)質(zhì)合成，大部分的多肽抗原要求長度范圍在12－16個(gè)殘基，而且相對容易合成。盡管9個(gè)殘基或更短的多肽已經(jīng)是有效的抗原，但是長于12到16氨基酸的多肽可能包含幾個(gè)決定簇。超過20殘基的多肽開始提出了更大的合成挑戰(zhàn)。

疏水殘基
????當(dāng)設(shè)計(jì)多肽時(shí)，請注意諸如Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe和Val類殘基，它們會增加出現(xiàn)多肽可溶性問題的概率。注意保持疏水殘基低于50％

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